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　　ELISA試劑盒原理——抗原與抗體的特異性結(jié)合

　　ELISA試劑盒的檢測原理正是基于?抗原與抗體的特異性結(jié)合?，通過酶促信號(hào)放大實(shí)現(xiàn)對(duì)待測物的精準(zhǔn)定量或定性分析。

　　一、原理邏輯

　　特異性結(jié)合基礎(chǔ)?：抗原分子的抗原決定簇，能與對(duì)應(yīng)抗體的可變區(qū)發(fā)生高度專一的互補(bǔ)結(jié)合，不會(huì)與無關(guān)物質(zhì)發(fā)生非特異性反應(yīng)，這是ELISA檢測高特異性的核心來源。

　　固相載體固定?：實(shí)驗(yàn)前將已知的抗原或抗體包被在96孔微孔板的固相表面，讓后續(xù)的免疫反應(yīng)都在固相載體上完成，便于通過洗板步驟去除未結(jié)合的游離雜質(zhì)。

　　酶標(biāo)記信號(hào)放大?：將辣根過氧化物酶(HRP)等標(biāo)記酶與抗原/抗體偶聯(lián)，形成酶標(biāo)記物，該標(biāo)記物既保留免疫活性，也保留酶的催化活性。

　　顯色信號(hào)讀取?：加入酶的底物后，標(biāo)記酶會(huì)催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物顏色深淺與樣本中待測抗原/抗體的含量正相關(guān)，通過酶標(biāo)儀檢測吸光度即可完成定量分析。

　　二、完整反應(yīng)流程

　　向包被好的微孔板中加入待測樣本，若樣本中含有目標(biāo)抗原/抗體，就會(huì)與固相上的對(duì)應(yīng)抗體/抗原發(fā)生特異性結(jié)合，形成固相免疫復(fù)合物。

　　洗板去除未結(jié)合的游離樣本雜質(zhì)，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，使其與固相上的免疫復(fù)合物進(jìn)一步結(jié)合。

　　再次洗板去除未結(jié)合的游離酶標(biāo)記物，此時(shí)固相上僅保留帶有標(biāo)記酶的特異性免疫復(fù)合物。

　　加入顯色底物，標(biāo)記酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，反應(yīng)終止后通過酶標(biāo)儀讀取450nm波長下的吸光度值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出待測樣本中目標(biāo)物的濃度。

　　三、該原理的優(yōu)勢

　　特異性強(qiáng)?：依托抗原抗體的專屬結(jié)合特性，可從復(fù)雜的樣本基質(zhì)中精準(zhǔn)識(shí)別目標(biāo)物，大幅降低非特異性干擾。

　　靈敏度高?：酶的催化作用可實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大，能檢測到樣本中ng/L級(jí)甚至更低濃度的微量待測物。

　　適配性廣?：可靈活調(diào)整包被物與標(biāo)記物，適配微囊藻毒素、疾病標(biāo)志物、蛋白等幾乎所有具備對(duì)應(yīng)抗體的檢測對(duì)象。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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